CRISPR) jẹ́ ọ̀nà ìṣàtúnṣe ìjìnlẹ̀ ìran kẹta: CRISPR yí ayé padà.

Àwọn ìtúnṣe palindromic kukuru tí a ń pè ní CRISPR (CRISPR) jẹ́ ọ̀nà ìṣàtúnṣe jìnómù ìran kẹta tí ó ti yí ayé padà pẹ̀lú àwọn àbájáde gíga rẹ̀. A ti lò ó láti tọ́jú onírúurú àrùn àti àkóràn. Oríṣiríṣi bakitéríà àti àwọn prokaryotes mìíràn (bíi archaea) tún ní àwọn ètò CRISPR/Cas9 láti dáàbò bo ara wọn lọ́wọ́ àwọn phages. A ti ròyìn pé àwọn ọgbọ́n ìtọ́jú CRISPR/Cas9 lè dènà ìdàgbàsókè àti ìlọsíwájú àrùn jẹjẹrẹ ọmú mẹ́ta (TNBC) nípa títọ́ka sí àwọn jínì resistance tí ó ṣeé ṣe kí ó yí padà, ìkọ̀wé, àti ìlànà epigenetic. Àwọn ìtọ́jú ìlera wọ̀nyí lè ran àwọn ìṣòro líle koko bíi resistance oògùn tí a rí nínú TNBC pàápàá. Lọ́wọ́lọ́wọ́, onírúurú ọ̀nà ni a ń lò láti fi CRISPR/Cas9 ránṣẹ́ sí àwọn sẹ́ẹ̀lì tí a fojú sí, bíi ti ara (microinjection, electroporation àti hydrodynamic modes), viral (adeno-associated virus àti lentivirus) àti non-viral (liposomes àti lipid nanoparticles). )-particles). Bó tilẹ̀ jẹ́ pé a ti ṣe àgbékalẹ̀ onírúurú àwọn àpẹẹrẹ láti ṣe ìwádìí lórí àwọn okùnfà mọ́lẹ́kúlù tí ó ń fa TNBC, àìsí àwọn ọ̀nà tí ó ṣe pàtàkì àti tí a fojúsùn fún fífi àwọn irinṣẹ́ ìṣàtúnṣe jìnómù ní vivo dín ìlò wọn kù. Ní àkótán, àtúnyẹ̀wò yìí ṣe àyẹ̀wò ìlọsíwájú, àwọn ìpèníjà, àwọn ìdíwọ́, àti àwọn ìfojúsùn ìtọ́jú CRISPR/Cas9 fún TNBC ní kíkún lórí ẹ̀rí tí ó wà. A tún tẹnu mọ́ bí àpapọ̀ ọgbọ́n ìjìnlẹ̀ àti ẹ̀kọ́ ẹ̀rọ ṣe lè mú àwọn ọgbọ́n CRISPR/Cas9 sunwọ̀n síi nínú ìtọ́jú TNBC.
A máa ń fi àrùn jẹjẹrẹ hàn nípa pípín sẹ́ẹ̀lì tí a kò ṣàkóso, ìdàrúdàpọ̀ àwọn ibi tí a ń yẹ̀ sí sẹ́ẹ̀lì, àti àwọn ìyípadà nínú àwọn jínì tí ń dín àrùn jẹjẹrẹ kù (TSGs) (Matthews et al., 2022). Láàrín oríṣiríṣi àrùn jẹjẹrẹ, àrùn jẹjẹrẹ ọmú ni irú àrùn jẹjẹrẹ tí ó wọ́pọ̀ jùlọ nínú àwọn obìnrin, ó sì ní iye ikú gíga kárí ayé (Waks àti Winer, 2019). Àrùn jẹjẹrẹ ọmú jẹ́ àrùn tí ó yàtọ̀ síra pẹ̀lú onírúurú ànímọ́, bíi àwọn ẹ̀yà ara histological àti ti ẹ̀dá, ìfihàn àti ìwà ìṣègùn, àti ìdáhùn sí ìtọ́jú (Weigelt et al., 2010). Ìpínsísọ̀rí àrùn jẹjẹrẹ ọmú pèsè òye pípéye fún àyẹ̀wò àrùn jẹjẹrẹ ọmú àti àsọtẹ́lẹ̀ àrùn jẹjẹrẹ. Lílo àwọn àmì àrùn jẹjẹrẹ tí ó wọ́pọ̀ àti àwọn àmì àrùn jẹjẹrẹ ti jẹ́ ìlànà pàtàkì fún ìpínsísọ̀rí àrùn jẹjẹrẹ ọmú (Tsang àti Tse, 2019). Ọ̀pọ̀lọpọ̀ nǹkan ló ní ipa lórí àsọtẹ́lẹ̀ àti ìdáhùn sí ìtọ́jú àrùn jẹjẹrẹ ọmú, títí bí wíwà estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2/neu), àti ìpele histological, irú tumor, àti ìpele. Ìwọ̀n àti Ìṣẹ̀dá Ìṣẹ̀dá Nódì Lymph (Al-Tubaiti, 2020). A ti ṣàwárí àwọn oríṣi márùn-ún ti àrùn jẹjẹrẹ ọmú, títí bí luminal A, luminal B, HER2-enriched, basal-like, àti claudin-low (Prat et al., 2015). TNBC jẹ́ oríṣi àrùn jẹjẹrẹ tí kò ṣe àfihàn gbogbo ER, PR, àti HER2 (Yin et al., 2020). Àwọn àmì àrùn wọ̀nyí ní í ṣe pẹ̀lú TNBC, wọ́n ń fìdí rẹ̀ múlẹ̀ pé ó ń yára lọ àti pé ó ń hùwà ipá ju irú àrùn jẹjẹrẹ ọmú mìíràn lọ (Feng et al., 2018). Ní ​​àfikún, Peru et al (2000) lo ìmọ̀ ẹ̀rọ microarray láti tún ṣe àkójọpọ̀ àrùn jẹjẹrẹ ọmú àti láti dá àwọn oríṣi márùn-ún ti àrùn jẹjẹrẹ ọmú mọ̀ (Cadenas, 2012). Àrùn jẹjẹrẹ ọmú bíi Basal jẹ́ oríṣi àrùn jẹjẹrẹ ọmú tí ó ní ìrísí mẹ́ta-odi tí ó sì ní í ṣe pẹ̀lú ìlọsíwájú kíákíá. Ó yẹ kí a kíyèsí pé gbogbo àwọn àrùn jẹjẹrẹ ọmú tí ó dàbí basal ni a sábà máa ń ṣàyẹ̀wò gẹ́gẹ́ bí TNBC, ṣùgbọ́n 77% nìkan ni ó jẹ́ TNBC; Ní ìyàtọ̀ sí èyí, 71–91% ti TNBC jẹ́ basal-like, èyí tí ó fihàn pé àwọn oríṣi àrùn jẹjẹrẹ ọmú méjì wọ̀nyí jọra wọ́n sì dúró fún oríṣiríṣi ìpín (Wang D.-Y. et al., 2019). Èyí ṣẹ̀dá àìní láti ṣe àfihàn ìyàtọ̀ TNBC láti ṣàlàyé àsọtẹ́lẹ̀ àti láti mọ àwọn ìdáhùn tí ó ṣeé ṣe sí àwọn ìtọ́jú lọ́wọ́lọ́wọ́ àti ọjọ́ iwájú. Ní àfikún, TNBC jẹ́ 15–20% gbogbo àwọn ọ̀ràn àrùn jẹjẹrẹ ọmú ó sì wọ́pọ̀ jùlọ nínú àwọn obìnrin tí kò tíì pé ọmọ ọdún 50. A ti ròyìn àwọn ìyípadà BRCA1 tàbí BRCA2 ní nǹkan bí 20% àwọn ọ̀ràn TNBC (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017)., 2020). Àwọn ìwádìí tún ti fihàn pé TNBC ní àyíká ààbò ara tó yàtọ̀ tí ó ní àwọn ipele gíga ti àwọn ohun tí ó ń fa ìdàgbàsókè endothelial vascular, àwọn macrophages tí ó ní í ṣe pẹ̀lú tumor-associated tumor (TAMs), tumor-infiltrating lymphocytes (TILs), àti àwọn molecule mìíràn tí ó ní í ṣe pẹ̀lú ìdàgbàsókè tumor àti ìrìnkiri. Nítorí náà, òye microenvironment ti TNBC ṣe pàtàkì fún àsọtẹ́lẹ̀ àti ìtọ́jú rẹ̀ (Fan and He, 2022).
Láti ṣe àyẹ̀wò àsọtẹ́lẹ̀ TNBC àti láti rí i dájú pé ìtọ́jú tó gbéṣẹ́, àyẹ̀wò tó péye, tó dá lórí immunohistochemistry (IHC) láti ṣàwárí ER, PR àti HER2, àti mammography láti ṣàwárí àwọn èèmọ́ ọmú, ṣe pàtàkì. Síbẹ̀síbẹ̀, mammography kò lè ṣàfihàn àwọn àmì àrùn inú ara bíi necrosis àti fibrosis (Deepak Singh et al., 2021). Nítorí pé àsọtẹ́lẹ̀ àti àyẹ̀wò tí kò dára kò jẹ́ kí àwọn dókítà kọ àwọn oògùn tó tọ́ (Chaudhary, 2020), a ń lo onírúurú ọgbọ́n láti mú ìtọ́jú àwọn aláìsàn pẹ̀lú TNBC sunwọ̀n sí i. Lọ́wọ́lọ́wọ́, a ń lo àwọn oògùn méjì, doxorubicin àti cyclophosphamide, fún àwọn aláìsàn pẹ̀lú TNBC, wọ́n sì ti fi àwọn àbájáde rere hàn. Ní àfikún, a ń lo àwọn oògùn platinum mìíràn, bíi carboplatin àti cisplatin (Sikov et al., 2015). Ní ​​àfikún, a ti lo àwọn inhibitors PARP bíi Olaparib, Velaparib, àti PF-01367338 gẹ́gẹ́ bí àwọn oògùn chemotherapy tó ṣeé ṣe fún ìtọ́jú TNBC (Ishino et al., 2018). Láti ìgbà tí a ti ròyìn pé àwọn ọ̀nà ìfàmìsí Wnt/b-Catenin, NOCHCH, àti Hedgehog ní ipa nínú ìṣẹ̀lẹ̀ àti ìlọsíwájú TNBC, títẹ̀síwájú àwọn oògùn sí àwọn ọ̀nà wọ̀nyí lè jẹ́ ọgbọ́n pàtàkì (Aysola et al., 2013). Bó tilẹ̀ jẹ́ pé iṣẹ́ abẹ, ìtọ́jú ìtànṣán àti chemotherapy ṣì jẹ́ olórí ìtọ́jú fún TNBC lónìí, ìlọsíwájú pàtàkì ni a ti ṣe nínú ṣíṣe àwọn ìtọ́jú tuntun pẹ̀lú ìtọ́jú tí a fojú sí, ìtọ́jú ìlera, onírúurú irinṣẹ́ ìṣàtúnṣe jínì tí ó ní í ṣe pẹ̀lú CRISPR bíi Cas9n, dCas9. , CRISPR/Cas12, àtúnṣe àkọ́kọ́, àti ìtọ́jú jínì tí a fojú sí CRISPR/Cas9. Níbí, a ó dojúkọ onírúurú irinṣẹ́ ìṣàtúnṣe jínì tí ó ní í ṣe pẹ̀lú CRISPR tí a lò nínú ìtọ́jú TNBC. Lára wọn, CRISPR/Cas9 ti gba àfiyèsí gbogbogbòò.
Cas9n, tí a tún mọ̀ sí Cas9 nickase, jẹ́ oríṣiríṣi amuaradagba Cas9 tí a ṣe àgbékalẹ̀ rẹ̀ láti inú ètò ìṣàtúnṣe genome CRISPR/Cas9 (Gupta et al., 2019). Ní ​​ìrísí àtilẹ̀wá rẹ̀, amuaradagba Cas9 ní àwọn agbègbè nuclease méjì: RuvC àti HNH, iṣẹ́ pàtàkì rẹ̀ ni pípín àwọn okùn DNA méjèèjì. Síbẹ̀síbẹ̀, ní Cas9n, ọ̀kan lára ​​àwọn agbègbè nuclease, HNH, ni a yípadà nínú ìrísí rẹ̀ ó sì di aláìṣiṣẹ́. Nítorí náà, agbègbè HNH ti Cas9n kò ṣiṣẹ́. Àgbègbè RuvC nìkan ni ó ṣì ń ṣiṣẹ́, èyí tí ó fún Cas9n láyè láti gé tàbí ṣẹ̀dá ìfọ́ lórí àwọn okùn DNA kan ṣoṣo (Trevino àti Zhang, 2014). Ní ​​ìfiwéra pẹ̀lú Cas9, Cas9n lè dín àwọn ipa tí kò ní àfojúsùn kù dáadáa kí ó sì mú àwọn ọ̀nà àtúnṣe sẹ́ẹ̀lì sunwọ̀n síi. A lè lo Cas9n láti yanjú onírúurú ìṣòro, bíi ṣíṣẹ̀dá ìfọ́ ní àwọn ibi pàtó kan nínú DNA oní-okùn méjì. Fún ète yìí, a parapọ̀ mọ́líkúùlù Cas9n méjì pọ̀, a sì lò wọ́n papọ̀ (Yee, 2016). Ìlànà ìdàpọ̀ kinase 3 (MLK3) jẹ́ protein kinase tí a mú ṣiṣẹ́ nínú mitogen tí ó ń ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí olùṣàkóso pàtàkì nígbà tí TNBC metastasis bá bẹ̀rẹ̀ (Cronan et al., 2012).
MLK3 le mu ọpọlọpọ awọn ipa ọna ifihan agbara ṣiṣẹ ti o yori si metastasis TNBC. Fun apẹẹrẹ, ipa ọna c-Jun N-terminal kinase (JNK) n ṣakoso išipopada sẹẹli ati ibajẹ matrix extracellular, ati MLK3 n mu ipa ọna JNK ṣiṣẹ, nitorinaa o mu gbigbe sẹẹli pọ si ati fifun awọn ohun-ini invasive (Rattanasinchai ati Gallo, 2016). MLK3 tun n ṣakoso EMT. Lati ṣe eyi, o mu awọn ifosiwewe transcription isalẹ ṣiṣẹ gẹgẹbi Snail, Slug ati Twist. Awọn ifosiwewe wọnyi n ṣe idiwọ ifihan awọn ami epithelial ati igbelaruge ifihan ti awọn ami mesenchymal, ti o yori si gbigba ti ẹya metastatic kan (Casalino et al., 2023). A ti ṣe akiyesi MLK3 lati ṣe ipa ninu atunṣe ECM ati imuṣiṣẹ ti awọn proteases bii matrix metalloproteinases (MMPs) ti o ba ECM jẹ. Eyi n ṣe iranlọwọ fun ikọlu sẹẹli tumor ati itankale si awọn aaye jijinna (Katari et al., 2019). Nitorinaa, awọn iwadi iṣaaju ti fihan pe MLK3 ṣe ipa pataki ninu TNBC. Rattanasinchai àti Gallo lo àwọn àwòṣe TNBC láti ṣe ìwádìí nípa ipa MLK3, wọ́n sì rí i pé ó ń gbé ìdàgbàsókè àrùn jẹjẹrẹ lárugẹ nípasẹ̀ àwọn ọ̀nà ìfàmì pàtó kan. Wọ́n lo CRISPR/Cas9n láti ṣe àtúnṣe MLK3, wọ́n sì rí ìdínkù pàtàkì nínú ìṣẹ̀dá TNBC (Rattanasinchai àti Gallo, 2016).
dCas9, tí a sábà máa ń pè ní aláìṣiṣẹ́ Cas9, jẹ́ irú àtúnṣe tí a ṣe àtúnṣe sí amuaradagba Cas9. Láìdàbí Cas9 tí ń ṣiṣẹ́, dCas9 kò ní ìṣiṣẹ́ endonuclease, èyí tí ó mú kí ó má ​​lè fa ìfọ́ DNA onípele méjì. Nítorí náà, a lè lo dCas9 láti fojú sí àwọn agbègbè pàtó kan nínú genome láìsí ìyípadà tàbí àtúnṣe sí ìtẹ̀lé DNA (Wang et al., 2016). Nínú dCas9, àwọn protein endonuclease méjì, RuvC àti HNH, ni a kò ṣiṣẹ́ nípa dídín àwọn ohun tí ó jẹ́ amino acid pàtàkì kù. (Richter et al., 2016). Láìka àìsí ìṣiṣẹ́ ìpínyà DNA rẹ̀ sí, dCas9 ń kópa nínú ọ̀pọ̀lọpọ̀ ipa pàtàkì nínú ìwádìí ìran àti ìmọ̀-ẹ̀rọ nípa ẹ̀dá. Fún àpẹẹrẹ, ó ń gba ààyè láti rí àwọn agbègbè pàtó ti genome, ó ń mú kí ìlànà ìkọ̀wé rọrùn, ó sì ń gbé àwọn àtúnṣe epigenetic lárugẹ (Brocken et al., 2018).
Àkójọpọ̀ ìkọ̀wé ZEB1 (zinc finger E-box binding homeobox 1) kó ipa pàtàkì àti pàtàkì nínú ṣíṣe àtúnṣe epithelial-mesenchymal transition (EMT), ìlànà sẹ́ẹ̀lì kan tí ó máa ń wáyé nígbà ìdàgbàsókè ọmọ inú oyun, àtúnṣe àsopọ ara, àti ìlọsíwájú àrùn jẹjẹrẹ. Ó níí ṣe pẹ̀lú ìyípadà àwọn sẹ́ẹ̀lì epithelial sí àwọn sẹ́ẹ̀lì mesenchymal, èyí tí ó máa ń yọrí sí àwọn ìyípadà nínú ìrísí sẹ́ẹ̀lì, ìṣíṣẹ́, ìfagbára, àti bẹ́ẹ̀ bẹ́ẹ̀ lọ (Wu et al., 2020). ZEB1 ń dí ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn àmì epithelial lọ́wọ́, bíi E-cadherin àti Occludin, tí wọ́n jẹ́ olùṣe ìtọ́jú ìsopọ̀ sẹ́ẹ̀lì àti polarity ti àwọn sẹ́ẹ̀lì epithelial ní TNBC (Moreno-Bueno et al., 2008). Ní ​​àfikún, ZEB1 ń mú àwọn àmì kan ṣiṣẹ́ bíi N-cadherin, vimentin àti fibronectin (Konradi et al., 2014) ó sì tún ń ṣe ìṣàkóso àwọn jínì tí ó níí ṣe pẹ̀lú àtúnṣe cytoskeletal bíi Rho GTPases àti matrix metalloproteinases (MMPs) (Huang). àti àwọn ẹlòmíràn, 2014). 2022), ní àfikún, ó tún ní ipa lórí onírúurú ipa ọ̀nà ìfàmìrán bíi ìyípadà growth factor-β (TGF-β), ìfàmìrán Wnt, àti bẹ́ẹ̀ bẹ́ẹ̀ lọ, nípa bẹ́ẹ̀ ó ń gbé ìkọlù èèmọ́ àti ìtasítasí nínú TNBC lárugẹ (Chen et al., 2016). ). Ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìwádìí àti ẹ̀rí ìmọ̀ sáyẹ́ǹsì fihàn pé ZEB1 ní agbára ńlá gẹ́gẹ́ bí olùrànlọ́wọ́ pàtàkì fún wíwá àti ìtọ́jú TNBC. Nínú ìwádìí kan láìpẹ́ yìí, Waryah et al. lo àwòṣe TNBC kan wọ́n sì ṣe àṣeyọrí ìdènà ZEB1 pátápátá nípasẹ̀ dCas9. Nítorí náà, wọ́n kíyèsí ìpele pàtó gíga àti ìdènà ZEB1 pátápátá ní àwọn ipò in vivo (Waryah et al., 2023).
CRISPR/Cas12 jẹ́ irinṣẹ́ àtúnṣe ìran tí a ń pè ní CRISPR/Cpf1. Ó wá láti inú ètò CRISPR/Cas, níbi tí ọ̀rọ̀ náà Cas12 tọ́ka sí amuaradagba tí ó níí ṣe pẹ̀lú CRISPR 12 (Bharathkumar et al., 2022), èyí tí ó jọ Cas9 pátápátá. Ìyàtọ̀ kan ṣoṣo ni pé ó ní amuaradagba Cas12 nínú. Ní ìfiwéra pẹ̀lú Cas9, Cas12 ní àwọn iṣẹ́ àrà ọ̀tọ̀ bíi ṣíṣe àwọn ìpẹ̀kun tí ó lẹ̀ mọ́ ara nígbà ìlànà àtúnṣe ìran, nígbà tí Cas9 ń ṣe àwọn ìpẹ̀kun tí ó rọ̀ (Wang et al., 2021). Ohun ìní Cas12 yìí ń ṣe àfikún sí ìmọ̀-ẹ̀rọ ìṣàtúnṣe DNA pàtó rẹ̀. Gẹ́gẹ́ bí amuaradagba tí ó lè dá DNA àfojúsùn mọ̀ dáadáa àti gé e, ó ní onírúurú ìlò, èyí tí ó mú kí ó jẹ́ irinṣẹ́ tí ó munadoko fún onírúurú ìlò, títí kan àtúnṣe ìran (Pickar-Oliver àti Gersbach, 2019).
Gẹ́gẹ́ bí àwọn ìyàtọ̀ CRISPR mìíràn, CRISPR/Cas12 tún lè mú àwọn jínì jáde tàbí mú kí wọ́n ṣiṣẹ́ ní TNBC, kí ó lè fojú sí àwọn jínì tí wọ́n kó ipa pàtàkì nínú ìṣẹ̀dá àrùn tàbí ìdáhùn sí ìtọ́jú (Yang àti Zhang, 2023). Láti ṣe àṣeyọrí ìlànà yìí, a ṣe àgbékalẹ̀ ìtọ́sọ́nà RNA (gRNA) kan tí ó ń darí Cas12 sí jínì tí a fojú sí. Nígbà tí Cas12 bá so mọ́ ibi tí a fojú sí, ó ń fa ìfọ́ oní-okùn méjì nínú DNA ó sì ń mú àwọn ìlànà àtúnṣe DNA ṣiṣẹ́. Nígbà ìlànà àtúnṣe, a lè fi àwọn nọ́tíkúọ́dì tí kò tọ́ kún un, èyí tí ó ń yọrí sí àwọn ìyípadà jínì àti pípadánù iṣẹ́ (Zhang et al., 2021a). Ní ​​àfikún, a tún lo ẹ̀yà tí a mú dara sí ti enzyme Cas12 (tí a ń pè ní dCas12) láti mú àwọn jínì ṣiṣẹ́. Nípa sísopọ̀ mọ́ ohun tí ń mú kí a lo transcription activator, ó ṣeé ṣe láti mú àwọn jínì kan jáde, nípa bẹ́ẹ̀ ó ń mú wọn ṣiṣẹ́. Ìmọ̀-ẹ̀rọ yìí ní agbára ńlá láti gbé ìṣiṣẹ́ àwọn jínì tí ń dín èèmọ́ kù (Sultan et al., 2022).
Ṣíṣe àtúnṣe Prime jẹ́ ìmọ̀ ẹ̀rọ àtúnṣe genome tuntun tí a ṣẹ̀ṣẹ̀ ṣe àgbékalẹ̀ rẹ̀ àti èyí tí ó ga jùlọ. Ó lè ṣe àtúnṣe DNA ti ohun alààyè kan ní pàtó (Chen àti Liu, 2023). Ṣíṣe àtúnṣe Prime ni a ṣe nípasẹ̀ ìsopọ̀ àwọn èròjà pàtàkì méjì: enzyme CRISPR/Cas9 tí a yípadà àti reverse transcriptase. Iṣẹ́ enzyme CRISPR/Cas9 ni láti yan àwọn ibi pàtó nínú genome, nígbàtí reverse transcriptase ń ran lọ́wọ́ láti ṣe àtúnṣe DNA dáadáa ní ibi tí a pààlà sí (Hassan et al., 2021). Nínú ẹ̀rọ àtúnṣe primer, ìgbésẹ̀ àkọ́kọ́ ní í ṣe pẹ̀lú ṣíṣẹ̀dá ìtọ́sọ́nà àtúnṣe primer RNA (pegRNA) (Standage-Beier et al., 2021). Ó ní ìtẹ̀léra àfojúsùn àti àwòṣe RNA tí ó bá ibi àtúnṣe tí a fẹ́ mu nínú DNA àfojúsùn mu. Lẹ́yìn náà, a fi pegRNA sínú àwọn sẹ́ẹ̀lì àfojúsùn pẹ̀lú nuclease àtúnṣe primer (PE2). PE2 jẹ́ protein fusion tí ó ní enzyme Cas9, reverse transcriptase, àti adapter àtúnṣe primer (Martín-Alonso et al., 2021). Nínú sẹ́ẹ̀lì náà, àwọn èròjà pegRNA àti PE2 ń wá DNA pàtó tí wọ́n fẹ́ yípadà. Ènsímù Cas9 ń gé DNA náà ó sì ń ṣẹ̀dá àwòṣe kan tí ó ní àwọn okùn kan ṣoṣo (Choi et al., 2022). Ìyípadà transcriptase ń lo àwòṣe yìí láti pèsè DNA fún àtúnṣe. Pẹ̀lú ṣíṣe àwòkọ DNA, àwọn ìtọ́ni fún ṣíṣe àtúnṣe àwòṣe RNA náà tún wà nínú rẹ̀. Níkẹyìn, a ń lo okùn DNA tuntun gẹ́gẹ́ bí àwòṣe láti tún ìfọ́ DNA náà ṣe, èyí tí ó ń yọrí sí ìtẹ̀léra DNA tí ó yí padà tí ó ní àtúnṣe tí a fẹ́ (Ochoa-Sanchez et al., 2021). Àwọn ọ̀nà ṣíṣe àtúnṣe primer lè yọrí sí àwọn ìyípadà tí ó gbòòrò nínú àwọn jiini. Ó lè fojú sí àwọn ìyípadà ojú ìwé, àwọn ìfikún, ìparẹ́, àti àwọn ìyípadà jínì pàápàá (Anzalone et al., 2019; Chen àti Liu, 2023). Ṣíṣe àtúnṣe Prime ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ àǹfààní lórí àwọn ìmọ̀ ẹ̀rọ ṣíṣe àtúnṣe jínì tẹ́lẹ̀. Àwọn wọ̀nyí ní ìṣedéédé tí ó pọ̀ sí i, àwọn ipa tí ó dínkù kúrò ní ibi-àfojúsùn, àti agbára láti ṣe àtúnṣe DNA láìgbára lé àwọn ìfọ́ DNA oní-méjì (Anzalone et al., 2020).
A kọ́kọ́ ṣe ìmọ̀ ẹ̀rọ CRISPR/Cas9 láti dáàbò bo bakitéríà kúrò nínú ìyípadà plasmid àti àkóràn phage, a sì tún lò ó lẹ́yìn náà gẹ́gẹ́ bí ohun èlò ìfojúsùn DNA tí ó gbéṣẹ́ tí ó dá lórí RNA fún ṣíṣe àtúnṣe genome (Jiang àti Doudna, 2017). Ní ​​àfikún, a ti ròyìn pé ètò CRISPR/Cas9 wà nínú 50% àti 87% ti àwọn genome bakitéríà àti archaeal, lẹ́sẹẹsẹ (Ishino et al., 2018). CRISPR/Cas9 jẹ́ ohun èlò tí ó ṣeé ṣe fún píparẹ́, fífi sínú àti ṣíṣe àtúnṣe èyíkéyìí ìtẹ̀léra genome tí kò báramu nípa lílo in vivo àti in vitro modes (Sabit et al., 2021). Jù bẹ́ẹ̀ lọ, a ti fihàn pé CRISPR/Cas9 jẹ́ apá kan ètò àjẹ́sára àdánidá nítorí pé ó ṣe pàtàkì fún àwọn genome tí a fẹ́ (Chen àti Zhang, 2018).
CRISPR/Cas9 ní Cas9 àti RNA ìtọ́sọ́nà kan ṣoṣo (sgRNA). Cas9 jẹ́ endonuclease tí ó ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ èròjà amuaradagba nínú. Ní àfikún, Cas9 ní àwọn ànímọ́ ìṣètò àti ìṣètò àrà ọ̀tọ̀ (Pacesa et al., 2022) nítorí pé ó ní àwọn lobes méjì: ìwádìí (REC) àti nuclease (NUC). A tún pín lobe REC sí àwọn agbègbè mẹ́ta: REC1, REC2, àti bridge helices (Cromwell et al., 2018). NUC ní àwọn lobes mẹ́ta, eyun RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH àti protospacer neighborable motif (PAM) interaction domain (Fig. 1) (Song et al., 2016). sgRNA ní àwọn èròjà méjì, pẹ̀lú CRISPR RNA (crRNA) àti transcoding small RNA (tracer RNA) (Fig. 1). sgRNA so amuaradagba Cas9 pọ mọ awọn asopọ lati ṣẹda eka ti nṣiṣe lọwọ kan, ti a tun mọ si eka effector (Richter et al., 2012). crRNA jẹ bata ipilẹ nucleotide 18–20 ti o ṣe ipa pataki ni mimọ awọn atẹle DNA afojusun. Ni afikun, crRNA so pọ mọ DNA afojusun, ati tracrRNA n ṣiṣẹ bi ipilẹ fun nuclease Cas9 lati so DNA afojusun naa (Manghwar et al., 2019). Ni apa keji, lẹsẹsẹ PAM ni awọn nucleotides mẹta, eyiti o jẹrisi, ṣalaye ati ṣe agbederu isopọ ti eka effector mọ DNA. Awọn subunits ti eka amuaradagba Cas9 RuvC ati HNH ni iṣẹ-ṣiṣe catalytic (Richter et al., 2012; Asmamaw ati Zawdie, 2021). Agbegbe nuclease HNH ti subunit Cas9 n ya okun DNA ti o ni nkan ṣe pẹlu crRNA. Agbègbè nuclease RuvC máa ń gé àwọn okùn DNA mìíràn, ó sì máa ń mú àwọn ìdènà onípele méjì (DSBs) jáde, lẹ́yìn èyí ni a ó ti mú àwọn ọ̀nà ìtúnṣe DNA méjì tó yàtọ̀ síra ṣiṣẹ́ (Jiang àti Doudna, 2017) (Àwòrán 1).
Àwòrán 1. Àkótán CRISPR/Cas9 (A). Àwọn èròjà ètò CRISPR/Cas9: (i). Cas9 endonuclease ló ń gé ìtẹ̀lé DNA tí a fẹ́, (ii) RNA ìtọ́sọ́nà kan ṣoṣo (sg) tí ó jáde láti inú ìdàpọ̀ crRNA àti tra-crRNA chimeras. (méjì). Cas9 ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ èròjà bíi Rec I, Rec II, NUC lobe (HNH àti Ruv C jẹ́ àwọn ẹ̀yà kékeré) àti agbègbè ìbáṣepọ̀ PAM (C) pẹ̀lú àwọn iṣẹ́ tí ó báramu. Àkópọ̀ amuaradagba CRISPR/Cas9 ń pín ìtẹ̀lé DNA sí àwọn fọ́ọ̀mù tí kò ní àfikún àti àfikún (D). CRISPR/Cas9 ń ṣe àtúnṣe genome ní ìpele mẹ́ta: ìdámọ̀, gígé àti àtúnṣe. sg-RNA tí a ṣe àgbékalẹ̀ ń darí Cas9 ó sì ń dá ìtẹ̀lé tí a fẹ́ mọ̀ nípasẹ̀ èròjà ìfikún crRNA. Cas9 mọ ìtẹ̀lé PAM ní 5′-NGG-3′ ó sì ń yọ́ DNA náà, ó ń ṣẹ̀dá àdàpọ̀ DNA-RNA ó sì ń mú kí ìyapa náà ṣiṣẹ́. Àgbègbè HNH ti Cas9 ń ya okùn afikún, àti àgbègbè RuvC ń ya okùn tí kò ní afikún. CRISPR/Cas9 ń ṣe àtúnṣe dsDNA nípa fífọ́ ọ ní ọ̀nà méjì: ìsopọ̀ tí kò ní ìdàpọ̀ (NHEJ) àti àtúnṣe tí a darí sí homology (HDR). NHEJ ń ṣe àtúnṣe DNA oní-ìdá méjì nígbà tí kò bá sí DNA oní-ìdá kan láti òkèèrè nípasẹ̀ ìlànà enzymatic, ẹ̀rọ tí ó lè ṣe àṣìṣe tí ó lè fi tàbí yọ àwọn ìtẹ̀lé DNA aláìṣeéṣe kúrò. HDR jẹ́ pàtó gan-an ó sì nílò àwọn àwòṣe DNA oní-ìdá kan náà.
Àwọn ipa ọ̀nà àtúnṣe CRISPR/Cas9 ní ìsopọ̀ òpin tí kò ní ìbáramu (NHEJ) àti àwọn ilana àtúnṣe tí a darí homology (HDR). NHEJ jẹ́ ipa ọ̀nà tí ó lè fa àṣìṣe nítorí pé ó ní í ṣe pẹ̀lú fífi sí i tàbí píparẹ́, kò sì nílò ìlànà kankan nígbà tí a bá ń ṣe àtúnṣe. Ó ń lo àwọn nucleotides àìròtẹ́lẹ̀ láti ṣe àwọn amuaradagba tí ó wọ́pọ̀ (Abbasi et al., 2021). Ètò àtúnṣe yìí ní àwọn àpapọ̀ mẹ́rin bíi KU complex, cross-complementing protein complex type 4 (XRCC-4), enzyme processing end DNA, àti protein kinase DNA-PKcs (Abbasi et al., 2021). Prótéènì ìṣọ̀kan KU ní àwọn ìpín méjì, Ku 70 àti Ku 80, ó sì kó ipa pàtàkì nínú ètò NHEJ, nítorí pé ètò àtúnṣe náà ni a bẹ̀rẹ̀ nípa ìsopọ̀ àwọn ìpín méjì (Ku 70 àti Ku 80) mọ́ àwọn òpin tí ó fẹ́rẹ̀ jẹ́ díẹ̀ tàbí tí ó fẹ́rẹ̀ẹ́ jẹ́ díẹ̀ ti DNA tí a fojú sí (Abbasi et al., 2021), tí ó ń ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí àgbékalẹ̀ láti gba àwọn ohun mìíràn tí ó ní í ṣe pẹ̀lú NHEJ sí ibi tí ó ti farapa (Yang et al., 2020). XRCC-4 àti DNA ligase jẹ́ àwọn amino acids 334 àti 911, lẹ́sẹẹsẹ, àti pé XRCC4-DNA ligase IV complex ń mú kí àwọn òpin DNA lílọ́pọ̀ (Chatterjee et al., 2015). Ẹ́ńsáìmù ìṣiṣẹ́ ìparí DNA, tí a tún mọ̀ sí polynucleotide kinase 3′-phosphate, jẹ́ ẹ́ńsáìmù ìṣiṣẹ́ ìparí DNA. Ó lè yọ ẹgbẹ́ 3′P kúrò nínú DNA kí ó sì phosphorylate ẹgbẹ́ 5′OH nígbà àtúnṣe DSB. Ó tún níí ṣe pẹ̀lú àtúnṣe àwọn ìfọ́-orí-orí-kan (SSBs) nípa lílo ọ̀nà àtúnṣe SSB (Chatterjee et al., 2015). Protein kinase DNA-PKcs jẹ́ protein kinase tí ó gbẹ́kẹ̀lé DNA tí ó ní ìpín-ẹ̀yà catalytic ti PIKKs (phosphatidylinositol 3-kinase-related kinases) àti ataxia telangiectasia mutated (ATM) ìdílé, àti ATM àti Rad3-related strand breaks (DSBs) àti single-strand breaks (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016).
HDR jẹ́ ẹ̀rọ àtúnṣe tó péye jù àti tó yẹ nítorí pé a ń da ìwífún náà kọ nípa lílo ìrísí DNA duplex tó jẹ́ ti ẹgbẹ́, bó tilẹ̀ jẹ́ pé ó nílò wíwà àwọn chromatids arábìnrin. Èyí máa ń ṣẹlẹ̀ nígbà ìpele S/G2 ti ìyípo sẹ́ẹ̀lì ẹranko. HDR máa ń wáyé ní pàtàkì nínú àwọn ẹ̀yà ìwúkàrà, ṣùgbọ́n NHEJ ṣe pàtàkì nínú àwọn ẹranko onírun (Burma et al., 2006; Abbasi et al., 2021). Ẹ̀rọ àtúnṣe pípé ni a fihàn nínú Àwòrán 1.
Níwọ́n ìgbà tí àwọn àìlera ìbílẹ̀ àti ti ìran àtijọ́ ló ń fa TNBC, àtúnṣe àwọn àìlera ìbílẹ̀/epigenomic tó burú jáì nípa lílo CRISPR/Cas9 lè jẹ́ ọ̀nà ìtọ́jú tó bójú mu (Chen et al., 2019). Ní ​​àfikún, àwọn ohun tó ń fa ìkọ̀wé kan pàtó nínú ìṣètò ìkọ̀wé kan náà lè fi àwọn ànímọ́ àrà ọ̀tọ̀ ti àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ hàn, èyí tó dábàá pé ìṣètò ìkọ̀wé lè jẹ́ ọ̀nà tó dára jù fún ìtọ́jú àrùn jẹjẹrẹ (Drost et al., 2017). Lílo àwọn ànímọ́ ìbílẹ̀ wọ̀nyí ti àwọn èèmọ́, bíi ti ìran, ti ìran àti ti ìran, fún ìdàgbàsókè oògùn lè mú kí àwọn àbájáde ìṣègùn sunwọ̀n sí i kí ó sì dín owó ìwádìí kù. CRISPR jẹ́ ohun èlò ìṣàtúnṣe ìbílẹ̀ tó lè ṣe àwárí àti dá àwọn ibi-afẹ́de ìbílẹ̀ tó ń fa àrùn jẹjẹrẹ mọ̀, ṣùgbọ́n a tún lè lò ó láti ṣàtúnṣe, dínà, àti láti yí àwọn èèmọ́ ìbílẹ̀ padà nínú àwọn sẹ́ẹ̀lì ènìyàn (Tábìlì 1) (Ahmed et al., 2021). Ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn ìṣàyẹ̀wò CRISPR ni a ti ṣe láti wá àwọn jínì tó ní í ṣe pẹ̀lú àwọn ohun tó ń dín èèmọ́ ìkọ́kọ́ kù, àwọn èèmọ́ ìkọ́kọ́, àti ìdènà oògùn. Lilo CRISPR/Cas9 lati ṣatunkọ awọn oncogenes TNBC ni a fihan ni Aworan 2.
Àwòrán 2. Ṣíṣe àtúnṣe ìran àwọn oríṣiríṣi TNBC oncogenes nípa lílo CRISPR/Cas9 tí ó yọrí sí ìdínkù nínú ìdàgbàsókè èèmọ́ àti ìṣẹ̀dá ara. Àwọn oncogenes wọ̀nyí ní CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 àti CXCR7, Crypto1, ROR1 àti ST8SIA, tí ó ní ipa nínú ìṣẹ̀lẹ̀ àti ìṣẹ̀dá ara TNBC.
Ìrìnkiri sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ, ìkọlù, àti ìyípadà epithelial-mesenchymal (EMT) ní í ṣe pẹ̀lú ITGA9. Àwọn ìwádìí tí a ti ṣe tẹ́lẹ̀ ti fihàn pé ITGA9 jẹ́ olùkópa pàtàkì nínú ipa ọ̀nà Notch ó sì ń kó ipa pàtàkì nínú ìdàgbàsókè rhabdomyosarcoma metastasis (Molist et al., 2020). Ní ​​àfikún, a rí i pé ITGA9 ní ìbáṣepọ̀ pẹ́lú àsọtẹ́lẹ̀ aláìsàn nínú ọ̀pọ̀lọpọ̀ irú àrùn jẹjẹrẹ, títí kan àrùn jẹjẹrẹ ọmú (Wang Z. et al., 2019). Ní ​​àfikún, ìwádìí bioinformatics ti ITGA9 fihàn pé ìfarahàn rẹ̀ nínú TNBC ga ju ti àwọn oríṣi àrùn jẹjẹrẹ ọmú mìíràn lọ. Àwọn ìpele ITGA9 tí ó ga jùlọ ní í ṣe pẹ̀lú ìdàgbàsókè àrùn jẹjẹrẹ àti ìpadàsẹ̀yìn nínú àwọn aláìsàn TNBC. Ìkọlù ITGA9 láti ọwọ́ CRISPR/Cas9 yọrí sí àwọn ohun-ìní bíi ti sẹ́ẹ̀lì ara (CSC), angiogenesis àrùn jẹjẹrẹ, ìdàgbàsókè àrùn jẹjẹrẹ, àti ìdínkù metastasis nípa gbígbé ìbàjẹ́ β-catenin lárugẹ ní TNBC (Wang Z. et al., 2019).
Crypto-1 jẹ́ ọmọ ẹgbẹ́ ìdílé TGF-β, ó sì ṣe pàtàkì fún ìṣẹ̀dá embryogenesis ní ìbẹ̀rẹ̀, ìtọ́jú sẹ́ẹ̀lì stem, àti ìṣẹ̀dá àrùn jẹjẹrẹ (Ishii et al., 2021). Tí a tún mọ̀ sí Tdgf-1, ó jẹ́ amuaradagba ìfàmọ́ra GPI tí ó ní ipa nínú ìṣètò ìṣẹ̀dá ìpìlẹ̀, mesoderm àti endoderm, àti ìdásílẹ̀ àìdọ́gba òsì/ọtún nínú ìdàgbàsókè àwọn ẹ̀yà ara nígbà embryogenesis (Zhang et al., 2021b). Ní ​​àfikún, a ti fihàn pé Cripto-1 ní ipa nínú ìyípadà epithelial-mesenchymal (EMT) gẹ́gẹ́ bí àmì sẹ́ẹ̀lì stem (Zhang et al., 2021b). EMT ṣe pàtàkì kìí ṣe fún onírúurú iṣẹ́ bíi ìdàgbàsókè embryonic, fibrosis àti ìwòsàn ọgbẹ́, ṣùgbọ́n fún ìkọlù àrùn jẹjẹrẹ àti metastasis pẹ̀lú. Ní àfikún, a ti fihàn pé Cripto-1 ń bá àwọn olugba Notch mẹ́rin lò, ó sì ń mú kí ìdàgbàsókè wọn lẹ́yìn ìtumọ̀ pọ̀ sí i (Brandstadter àti Maillard, 2019). A mọ̀ pé ipa ọ̀nà ìfàmọ́ra Notch ní ipa nínú ìtọ́jú àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ ọmú ènìyàn. Àwọn ìwádìí ti fihàn pé ìkọlù Crypto-1 tí CRISPR/Cas9 ń ṣe ní ipa lórí ìdàgbàsókè àrùn jẹjẹrẹ àti ìfarapa. Nítorí náà, Crypto-1 lè di ibi ìtọ́jú pàtàkì fún TNBC (Castro et al., 2015).
Prótéènì XCL12 àti olùgbà chemokine rẹ̀ CXC (CXCR4 àti CXCR7) ń kó ipa onírúurú nínú ìdàgbàsókè sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ, ìdàgbàsókè, ìṣíkiri àti ìkọlù (Wu et al., 2015). Àwọn olùgbà chemokine wọ̀nyí ti ní ìbáṣepọ̀ pẹ̀lú ìdàgbàsókè TNBC nípasẹ̀ ọ̀pọ̀lọpọ̀ ipa ọ̀nà ìfitónilétí ní in vivo àti in vitro models (Wu et al., 2015). Ní ​​àfikún, ìṣiṣẹ́ CXCR4 àti CXCR7 ní ìbáṣepọ̀ pẹ̀lú ìfaradà sí ìṣẹ̀dá ara àti àsọtẹ́lẹ̀ tí kò dára ní TNBC (Karn et al., 2022). Nítorí náà, ìkọlù CXCR4 àti CXCR7 lè di àwọn jínì ìfojúsùn oògùn tí ó munadoko fún ìtọ́jú àrùn jẹjẹrẹ ọmú, títí kan TNBC. Ìwádìí láti ọwọ́ Yang et al. Yang et al. (2019) lo CRISPR/Cas9 láti pa àwọn jínì CXCR4 àti CXCR7 pọ̀, wọ́n sì rí i pé ìdàgbàsókè TNBC, ìdàgbàsókè, ìṣíkiri àti ìkọlù ni a dínkù gidigidi (Yang et al., 2019).
A ṣe akiyesi ilosoke ninu ipele miR-3662, oncogene TNBC kan, ninu awọn àsopọ akàn ọmu (Yi et al., 2022). A ti fihan pe idinku ti miR-3662 n dena idagbasoke tumor akàn ọmu ati metastasis ni vivo ati ni vitro (Agarwal ati Gupta, 2021). HBP-1 jẹ idinamọ agbara ti ifihan agbara Wnt/-catenin ati pe o ṣee ṣe ki o jẹ iduro fun idagbasoke ti awọn sẹẹli TNBC ti miR-3662. Laipẹ, Yi et al. rii pe axis miR-3662-HBP1 n ṣakoso ipa ọna ifihan agbara Wnt/-catenin ninu awọn sẹẹli TNBC (Yi et al., 2022). Nitori ifihan ti o ṣe pataki ti tumor, miR-3662 le jẹ ibi-afẹde itọju ti o ṣeeṣe fun TNBC. Nitorinaa, idinku ti CRISPR/Cas9 ti miR-3662 le jẹ ọna ti o tayọ fun idagbasoke awọn oogun tuntun fun itọju TNBC.
UBR5 jẹ́ 300 kDa nucleophosphoprotein tí a ti dá mọ̀ gẹ́gẹ́ bí olùṣàkóso pàtàkì ti tumorigenesis, metastasis, àti ìdáhùn àjẹ́mọ́ nínú onírúurú àrùn jẹjẹrẹ (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023). A ti ròyìn pé UBR5 ti ga sí i nínú àwọn àpẹẹrẹ TNBC ó sì ń ru iṣẹ́ ERα sókè nípa fífún ìdàgbàsókè nípasẹ̀ iṣẹ́ ubiquitin ligase rẹ̀ (Bolt et al., 2015). Gbogbo àwọn ìwádìí ìtẹ̀léra exome ti àwọn àpẹẹrẹ TNBC àkọ́kọ́ tún fi ìfarahàn UBR5 tí ó pọ̀ sí i hàn, èyí tí ó fi ipa rẹ̀ hàn nínú ìdàgbàsókè TNBC. Ní àfikún, píparẹ́ UBR5 tí CRISPR/Cas9 ń darí fi ìdíwọ́ pàtàkì ti metastasis TNBC àti ìdàgbàsókè hàn nínú àwọn àpẹẹrẹ eku ìdánwò. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, fífi UBR5 sínú àpẹẹrẹ eku irú ẹranko kan mú iṣẹ́ rẹ̀ padà sípò, nígbà tí a kò rí ipa yìí nínú àwọn oríṣi mutant tí kò ṣiṣẹ́ (Liao et al., 2017). Àìsí UBR5 níí ṣe pẹ̀lú ìdàgbàsókè apoptosis, necrosis, àti ìdínà ìdàgbàsókè èèmọ́ ní TNBC nítorí àìlera angiogenesis. Nítorí pípadánù UBR5, ìtànkálẹ̀ èèmọ́ sí àwọn ẹ̀yà ara jíjìn dínkù, UBR5 sì ń fa EMT tí kò dára ní pàtàkì nípa dídín ìfarahàn E-cadherin kù (Zhang àti Weinberg, 2018). Láìpẹ́ yìí, a fihàn pé UBR5 jẹ́ ohun pàtàkì nínú ìkọ̀wé PDL1 tí IFN-γ fa nínú TNBC nítorí àìsí ìṣiṣẹ́ ubiquitination E3. Ìwádìí RNA transcriptome fihàn pé UBR5 lè ní àwọn ipa ètò lórí àwọn jínì tí ó níí ṣe pẹ̀lú ipa ọ̀nà IFN-γ àti láti gbé transactivation PDL1 lárugẹ nípa mímú àwọn ipele ìṣiṣẹ́ ti protein kinase RNA (PKR) àti àwọn transducers àti activators rẹ̀ pọ̀ sí i. transcription 1 (STAT1) àti interferon regulatory factor 1 (IRF1). Sibẹsibẹ, idapọ ablation ti CRISPR/Cas9 ti ikosile UBR5 ati PD-L1 ni ipa itọju alakanṣe ju idena nikan lọ, pẹlu awọn ipa jinle lori ayika micro tumor (Wu et al., 2022). Nitorinaa, CRISPR/Cas9 le jẹ ohun elo pataki lati ṣe idiwọ iṣẹ UBR5, nitorinaa o dẹkun metastasis TNBC ati idagbasoke tumor.
ROR1 jẹ́ irú prótéènì transmembrane kan tí a máa ń rí nígbà tí àrùn jẹjẹrẹ bá ń wáyé àti nígbà tí ọmọ bá ń dàgbà, a sì ti dá a mọ̀ gẹ́gẹ́ bí prótéènì oncofetal (Nicholas Borcherding, 2014). Ìwà ìbàjẹ́ onírúurú àrùn jẹjẹrẹ ènìyàn ní í ṣe pẹ̀lú ìdàgbàsókè ROR1. Àwọn àbájáde rere ni a ti rí láti inú àwọn ìwádìí in vivo àti in vitro tí ó ní àwọn èròjà ìtọ́jú tí ó ń dojúkọ ROR1 (Chien et al., 2016). Ìpele gíga ti ROR1 mRNA nínú biopsies àsopọ ọmú tún ti ní í ṣe pẹ̀lú àwọn èèmọ́ ọmú bí basal-like breast (BL) àti ìṣípò wọn sí àwọn ẹ̀yà ara mìíràn. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, a ti dá ROR1 sílẹ̀ ju bó ṣe yẹ lọ gẹ́gẹ́ bí àmì àsọtẹ́lẹ̀ fún ìdàgbàsókè TNBC (Chien et al., 2016). Síbẹ̀síbẹ̀, pípa ROR1 lẹ́nu nípa lílo CRISPR/Cas9 láti dín ìdàgbàsókè àti metastasis TNBC kù yóò jẹ́ ọgbọ́n tí ó gbéṣẹ́.
Ìlànà sialylation náà níí ṣe pẹ̀lú fífi sialic acid kún glycoconjugates, èyí tí sialyltransferases (STs) ń ṣe ìyípadà. ST8SIA1 jẹ́ ti ìdílé ST ó sì ń kó ipa pàtàkì nínú ìṣẹ̀dá onírúurú àrùn bí lymphocytic leukemia àti colorectal cancer (Chang et al., 2018). Ìṣàyẹ̀wò ìtẹ̀lé RNA fihàn pé ST8SIA1 ní ìrísí gíga nínú àsopọ ọmú àwọn aláìsàn TNBC ó sì ní ìbáṣepọ̀ rere pẹ̀lú àwọn ìyípadà nínú gene p53 tí ń dín èèmọ́ kù, èyí tí ó lè ṣe àfikún sí ìṣẹ̀dá TNBC (Battula et al., 2017). Ní ​​àfikún, ST8SIA1 ní ipa nínú ìṣẹ̀dá àti ìtúnpadà TNBC, èyí tí ó fihàn pé ó kó ipa pàtàkì nínú ìṣẹ̀dá àti ìdàgbàsókè TNBC. Nínú àpẹẹrẹ in vitro ti TNBC, a fihàn pé pípa ST8SIA1 láti ọwọ́ CRIPSR/Cas9 ń dí ìdàgbàsókè àti ìṣẹ̀dá ìṣẹ̀dá (Battula et al., 2017). Èyí fihàn pé CRISPR/Cas9 lè jẹ́ ohun èlò pàtàkì fún dídí iṣẹ́ oncogene ST8SIA1 lọ́wọ́ nínú ìtọ́jú TNBC.
NAT1 jẹ́ ẹ́ńsáìmù ìṣẹ̀dá tí ó ń ṣe ìdàgbàsókè àwọn àkópọ̀ xenobiotic phase II, ó sì hàn gbangba nínú gbogbo àwọn àsopọ ènìyàn. NAT1 lè lo cofactor folate láti fojú sí acetyl-CoA (acetyl-CoA) kódà bí kò bá sí ohun èlò aromatic amine substrate (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014). Àwọn ìwádìí ti fihàn pé NAT1 ń ṣe àkóso iṣẹ́ matrix metalloproteinase 9 (MMP9) nínú àwọn àwòṣe sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ ọmú, ó sì ń dáàbò bo ara rẹ̀ lọ́wọ́ àwọn ẹ̀yà atẹ́gùn tí ń ṣe àtúnṣe (ROS) nígbà tí ènìyàn bá ń jẹ glucose (Wang et al., 2018). A ti fihàn pé píparẹ́ NAT1 kúrò ni a ti fihàn pé ó ń dènà ìdàpọ̀ pyruvate dehydrogenase, èyí tí ó ń yọrí sí àìṣiṣẹ́ mitochondrial (Wang L. et al., 2019). Ní ​​àfikún, onírúurú ìròyìn mìíràn ti fihàn pé ìdíwọ́ NAT1 nípa lílo àwọn molecule kékeré àti ìdákẹ́jẹ́ síRNA lè dín ìkọlù àti ìbísí àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ ọmú kù (Stepp et al., 2018). Láìpẹ́ yìí, a lo CRISPR/Cas9 láti dín NAT1 kù nínú ìlà sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ ọmú MDA-MB-231, èyí tó ní ipa lórí ìṣiṣẹ́ sẹ́ẹ̀lì ní ìbámu pẹ̀lú ìpele ìfarahàn rẹ̀. Ìwádìí yìí tún fihàn pé NAT-1 ṣe pàtàkì fún ìlọsíwájú àti ìfarahàn TNBC (Carlisle et al., 2020).
Àwọn ohun èlò ìṣàtúnṣe tí a ṣètò fún ìṣàtúnṣe àwọn oncogenes ni a ń lò láti ọwọ́ àwọn super enhancers, transcription factors àti cofactors (Hnisz et al., 2015). Ní ​​àfikún, a nílò àkójọ àwọn kinases tí ó dúró lórí cyclin-dependent (CDKs), bíi CDK7, CDK8, CDK9, CDK12, àti CDK13, fún ìṣàtúnṣe transcriptional. Láàrín wọn, CDK7 ní ipa nínú phosphorylation ti RNA polymerase II, èyí tí ó ṣe pàtàkì fún ìbẹ̀rẹ̀ àti ìfẹ̀sí transcripture oncogene nínú pathogenesis ti TNBC. Nínú ìwádìí pàtàkì kan, pípa CDK7 kúrò nípasẹ̀ CRISPR/Cas9 dí TNBC lọ́wọ́, èyí tí ó fihàn pé pathogenesis ti TNBC sinmi lórí CDK7 (Wang Y. et al., 2015).
Àwọn ìwádìí ti fihàn pé àwọn ìyípadà nínú MYC àti RBP (protein ìsopọ̀ RNA) lè fa apoptosis, nígbàtí àwọn ìyípadà jínì kan ṣoṣo nínú MYC tàbí RBP kò ní ipa lórí ìdàgbàsókè àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ (Einstein et al., 2021). A ti ṣe àyẹ̀wò ju 1000 RBPs nínú jínì ènìyàn nípa lílo ìkàwé tí ó dá lórí CRISPR/Cas9. Lára wọn, a rí 57 RBPs láti ṣe pàtàkì fún ìdàgbàsókè àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ pẹ̀lú àwọn ipele MYC tí ó ga jùlọ (Wheeler et al., 2020). Ní ​​àfikún, YTHDF2 ṣe pàtàkì fún mímú ìdàgbàsókè sẹ́ẹ̀lì TNBC dúró, ó sì dín iye àwọn àkọsílẹ̀ methylated kù nígbà ìkọ̀wé àti ìtumọ̀ gíga nínú àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ pẹ̀lú ìfarahàn MYC tí ó ga jùlọ. Ní àfikún, YTHDF2 kò ṣe pàtàkì fún àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ, èyí tí kò gbára lé àwọn ipele MYC tí ó ga jù láti pẹ́ títí àwọn aláìsàn TNBC yóò fi wà láàyè (Einstein et al., 2021), èyí tí ó fihàn pé ó lè jẹ́ ibi ìtọ́jú tí ó ṣeéṣe fún àwọn oògùn tí ó lè borí TNBC.
Àwọn èròjà ìka ọwọ́ Zinc (ZNFs) jẹ́ nǹkan bí 1% gbogbo ìṣẹ̀dá ènìyàn. Àwọn ìwádìí ti fihàn pé ZNF lè ṣàkóso ìdàgbàsókè sẹ́ẹ̀lì nínú onírúurú àrùn jẹjẹrẹ, bíi àrùn jẹjẹrẹ ẹ̀dọ̀, àrùn jẹjẹrẹ ọmú àti àrùn jẹjẹrẹ inú awọ (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017). Àwọn ilé ìkàwé tí CRISPR knockout ṣe ni a ti lò láti ṣe àyẹ̀wò onírúurú àwọn jínì ìdènà àrùn jẹjẹrẹ (TSGs) nínú àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ ọmú (Shalem et al., 2014). Láti ìgbà náà, ìwádìí transcriptomic ti àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ ọmú CRISPR/Cas9 ZNF319 tí a ti parẹ́ ti fihàn pé ZNF319 jẹ́ jínì ìdènà àrùn jẹjẹrẹ tí ó ń dín ìdàgbàsókè àrùn jẹjẹrẹ ọmú kù, nítorí náà ó ń kópa nínú onírúurú ọ̀nà ìfitónilétí àti àwọn iṣẹ́ ẹ̀dá alààyè mìíràn (Wang L. et al., 2022).
Ferroptosis jẹ́ irú ikú sẹ́ẹ̀lì tí a ti ṣètò tí ó sinmi lórí wíwà irin. A mọ̀ pé wíwà lipid peroxides ló ní ipa lórí ìdàgbàsókè ferroptosis. Ní àfikún, a ti ròyìn PKCβII láti fi peroxidation lipid hàn ní ìbẹ̀rẹ̀, àti pé ìdàgbàsókè lipid peroxidation ní í ṣe pẹ̀lú ferroptosis. Ṣíṣàyẹ̀wò ìkàwé àwọn inhibitors kinase CRISPR/Cas9 tí a ṣe àgbékalẹ̀ rẹ̀ fihàn pé PKCβII ní ipa nínú ìlànà lipid peroxidation, èyí tí ó ṣe pàtàkì fún ferroptosis nínú àwọn sẹ́ẹ̀lì MDA-MB-231 (Zhang et al., 2022). Nítorí náà, èyí fihàn pé lílọ PKCβII láti ọwọ́ CRISPR/Cas9 lè jẹ́ àfojúsùn jínì tí ó lè dènà àrùn tumor fún ìtọ́jú àwọn àrùn tí ó ní í ṣe pẹ̀lú ferroptosis (Zhang et al., 2022).
A gbàgbọ́ pé agbára ìdènà oògùn ló fa ìpakúpa tó tó 90% nínú àwọn aláìsàn àrùn jẹjẹrẹ, ó sì jẹ́ ọ̀kan lára ​​​​àwọn ìpèníjà pàtàkì nínú ìtọ́jú àrùn jẹjẹrẹ (Bukowski et al., 2020). Àwọn àbájáde náà fihàn pé iye tó tó ti àwọn jínì tó níí ṣe pẹ̀lú ìtújáde oògùn, àtúnṣe DNA, apoptosis àti onírúurú ipa ọ̀nà ìfàmọ́ra sẹ́ẹ̀lì ni ó níí ṣe pẹ̀lú agbára ìdènà oògùn (Haider et al., 2020). Láàrín wọn, ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn jínì ni a ti fojú sí nípasẹ̀ àwọn irinṣẹ́ CRISPR/Cas9, wọ́n sì ti fi àwọn àbájáde tó dájú hàn ní dídín agbára ìdènà oògùn kù àti mímú kí ìlò àwọn ìtọ́jú àrùn jẹjẹrẹ pọ̀ sí i (Vaghari-Tabari et al., 2022). Ní ​​àfikún, àwọn ilé ìkàwé ìṣàyẹ̀wò knockout gene CRISPR/Cas9 tó ga jùlọ ti ní ipa nínú ṣíṣe àtúnṣe iṣẹ́ àwọn ibi-afẹ́de jínì agbára ìdènà oògùn (Shalem et al., 2015). Láti dá àwọn jínì tó ń dènà àrùn paclitaxel mọ̀, a lo ìtẹ̀léra RNA pẹ̀lú ìṣàyẹ̀wò sgRNA ìkàwé genome-wide láti dá àwọn jínì mẹ́jọ mọ̀, títí kan histone deacetylase 9 (HDAC9), tó ní í ṣe pẹ̀lú àìlèdènà oògùn nínú àwọn aláìsàn tó ní TNBC tó ń padà bọ̀ (B et al., 2020). Nínú ìwádìí mìíràn, a rí ìfarahàn diserine/threonine àti tyrosine protein kinase (DSTYK) tó pọ̀ sí i nígbà tí àwọn aláìsàn TNBC tí wọ́n fi oògùn anticancer tọ́jú wà láàyè. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, ìkọlù CRISPR/Cas9 tí DSTYK ń ṣe mú kí apoptosis ti àwọn sẹ́ẹ̀lì tó ń dènà àrùn jẹjẹrẹ nínú vitro pọ̀ sí i (àwọn sẹ́ẹ̀lì SUM102PT àti àwọn sẹ́ẹ̀lì MDA-MB-468) àti àwòṣe TNBC in vivo (Ogbu et al., 2021).
Bó tilẹ̀ jẹ́ pé TNBC ní ìṣiṣẹ́ ọ̀nà MAPK tí kò dára, ipa ìtọ́jú tí a fojúsùn MEK kò dára. Ìbòjú ìkàwé genomic CRISPR/Cas9 fi hàn pé dídínà PSMG2 (proteome assembly chaperone 2) ń mú kí àwọn sẹ́ẹ̀lì TNBC BT549 àti MB468 mọ́ àwọn olùdènà MEK AZD6244. Ìparẹ́ CRISPR/Cas9 ti PSMG2 yí iṣẹ́ proteasome déédéé padà, èyí tí ó yọrí sí pípa PDPK1 tí a ṣe nípasẹ̀ autophagy, nípa bẹ́ẹ̀ ó ń mú kí àwọn sẹ́ẹ̀lì tumor sunwọ̀n sí i nínú àwọn àpẹẹrẹ eku TNBC tí AZD6244 (MEK inhibitor) àti MG132 (proteasome inhibitor) fà. Nítorí náà, a lè lo àwọn olùdènà proteasome àti MAP kinase (MEK) ní ìṣọ̀kan láti dín ìdàgbàsókè sẹ́ẹ̀lì tumor kù (Wang X. et al., 2022).
A ti lo CRISPR/Cas9 lati ṣe ayẹwo pipadanu iṣẹ jiini ti o yori si resistance TNBC (Shu et al., 2020). Ge et al. ṣalaye ilana ti resistance oogun ti awọn sẹẹli akàn ti a tọju pẹlu JQ1, inhibitor BET bromodomain (BBDI), ni TNBC. Ni lilo CRISPR/Cas9, wọn rii pe piparẹ jiini rb1 fa ki TNBC di alatako si oogun egboogi-akàn JQ1. Nitorinaa, iṣẹ rb1 ṣe pataki ninu idahun si awọn oogun JQ1 ni TNBC. Wọn tun royin pe paclitaxel jẹ inhibitor CDK4/6 kinase/microtubule, ati pe apapọ rẹ pẹlu awọn BBDI bii JQ1 le pese awọn idahun itọju ti o ni ileri si TNBC ti ko ni resistance oogun (Ge et al., 2020).
A ti royin pe aworan atunkọ ti RNA ti ko ni koodu gigun (lncRNA) ni o jẹ iduro fun resistance si itọju neoadjuvant ni TNBC. Iwadi yii fihan pe awọn iwe afọwọkọ MALAT1 lncRNA marun-un ni a fihan ni TNBC. Ni afikun, piparẹ MALAT1 ti CRISPR/Cas9 ti o ṣe iranlọwọ mu ifamọ ti awọn sẹẹli TNBC BT-549 pọ si paclitaxel ati doxorubicin, ti o daba ipa ti o pọju fun resistance MALAT1 ni TNBC (Shaath et al., 2021).
Àwọn ìyípadà nínú BRCA1 (BRCA1m) jẹ́ onírúurú, nítorí náà ó ṣòro láti rí wọn. Fífi PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase sí ojú ìwòye, alábàáṣiṣẹpọ̀ apanilẹ́rìn-ín ti BRCA1, lè mú kí ìfàmọ́ra oògùn TNBC pọ̀ sí i. Nípa lílo CRISPR/Cas9, pípa PARP1 kúrò mú kí ìfàmọ́ra àwọn oògùn apanilẹ́rìn-ín bíi doxorubicin, gemcitabine àti docetaxel pọ̀ sí àwọn sẹ́ẹ̀lì TNBC oníyípadà mBRCA1, èyí tó fihàn pé PARP1 tún ní ipa nínú ìdènà oògùn nínú TNBC (Vaghari-Tabari et al., 2022). Àwọn ìyípadà nínú àwọn ìpìlẹ̀ ìdènà àrùn jẹjẹrẹ BRCA1 tàbí BRCA2 ni a mọ̀ pé ó ń mú kí ó ṣeé ṣe láti ní àrùn jẹjẹrẹ ọmú nínú àwọn ènìyàn. Ìtọ́jú àwọn aláìsàn wọ̀nyí nílò lílo àwọn olùdènà PARP. Ní àfikún, a ti fihàn pé lílo CRISPR/Cas9 láti yọ nucleotide salvage factor DNPH1 kúrò nínú lílo CRISPR/Cas9 lè mú nucleotide 5-hydroxymethyldeoxyuridine (hmdU) monophosphate tó léwu kúrò, èyí sì ń mú kí ìdáhùn àwọn sẹ́ẹ̀lì tí kò ní BRCA pọ̀ sí ìmọ̀lára sí àwọn inhibitors PARP (Fugger). àti àwọn ẹlòmíràn, 2021). Nítorí náà, àwọn inhibitors CRISPR/Cas9 àti PARP1 lè di ètò ìtọ́jú pàtàkì fún TNBC.
Ìran glycoprotein (P-gp) jẹ́ ìran tí ó ní ìdènà oògùn púpọ̀ tí a sábà máa ń gbé ga ní nǹkan bí 41% gbogbo TNBC (Sun et al., 2020). A ti dámọ̀ ìfàsẹ́yìn oògùn tí P-gp ń fà gẹ́gẹ́ bí olùṣàkóso ìdènà oògùn nínú àrùn jẹjẹrẹ ọmú. Àwọn olùdènà P-gp ti fi ìfàsẹ́yìn sí àwọn oògùn ìdènà àrùn jẹjẹrẹ hàn ní àrùn jẹjẹrẹ ọmú (Famta et al., 2021). Nítorí náà, ìfàsẹ́yìn ìfàsẹ́yìn tàbí ìdènà àwọn olùdènà P-gp àti P-gp tí CRISPR/Cas9 ń ṣe le jẹ́ àwọn ọ̀nà pàtàkì láti borí ìdènà oògùn ní TNBC.
A mọ̀ pé ẹ̀rọ gbigbe kásẹ́ẹ̀tì ATP-binding G2 (ABCG2) ló ń fa ìdènà oògùn nínú TNBC (Palasuberniam et al., 2015), bó tilẹ̀ jẹ́ pé kò sí ìròyìn kankan lórí ìbáṣepọ̀ láàárín CRISPR/Cas9 àti ABCG2 silencing àti ìdínkù jínì tumor depressor. PTEN lè mú kí ìṣiṣẹ́ ABCG2 pọ̀ sí i (Palasuberniam et al., 2015), (Deepak Singh et al., 2021). Nítorí náà, lílo CRISP/Ca9 láti yọ ABCG2 kúrò àti pípapọ̀ mọ́ ABCG2 inhibitor lè jẹ́ ìtọ́jú tó yẹ láti borí ìdènà oògùn nínú TNBC. Táblì 2 mẹ́nu ba CRISPR/Cas9 tó ń fojúsùn gbogbo àwọn jínì resistance.
Táblì 2. CRISPR/Cas9 fojusi awọn jiini resistance TNBC oriṣiriṣi lati ṣe ifamọra awọn sẹẹli si awọn oogun egboogi-akàn.
Àwọn ilé ìkàwé CRISPR/Cas9 jẹ́ irinṣẹ́ tó ṣeé ṣe fún ṣíṣàyẹ̀wò àwọn ìyípadà jínì tó ní í ṣe pẹ̀lú àrùn jẹjẹrẹ (Chan et al., 2022). Ọ̀nà ìṣàyẹ̀wò yìí ní àwọn ìgbésẹ̀ mẹ́rin bíi (a) ìkọ́lé ìkàwé, (b) ìfàsẹ́yìn lentiviral, (c) ìṣàyẹ̀wò phenotypic, àti (d) ìṣàyẹ̀wò jínì afojusun. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé TNBC ní ìṣiṣẹ́ ọ̀nà MAPK tí kò dára, àsọtẹ́lẹ̀ ìṣègùn ti ìtọ́jú ìfọkànsí MEK fún àwọn aláìsàn TNBC tí wọ́n ní àwọn ìyípadà nínú àwọn jínì ìdènà èèmọ́ bíi PTEN, RB1, àti TP53 kò dára rárá.
Ni afikun, iboju knockout jiini kan ti o lo CRISPR/Cas9 ṣe idanwo molikula ti o lagbara julọ ati yiyan, dehydrocatrol, eyiti o wa ninu awọn eso ododo ati ewe Guatemala, lati loye ipa ti dehydrocatrol lori MDA-MB-231. Awọn ọna ti cytotoxicity sẹẹli yiyan. Awọn abuda ipilẹ Mesenchymal ti awọn iru TNBC. Iboju ti o da lori CRISPR/Cas9 yii tun ṣafihan pe HSD17B11, jiini ti o n ṣe koodu 17β-hydroxysteroid dehydrogenase iru 11, ni a fihan ni giga ninu awọn sẹẹli MDA-MB-231 ati pe o yọrisi dehydrofalcarinol kan pato fun awọn sẹẹli MDA-MB-231 (Grant et. al., 2020). Nitorinaa, eyi daba pe iboju genomic CRISPR/Cas9 ni agbara nla ni idanimọ awọn ilana ti o wa labẹ awọn ohun-ini anticancer ti awọn agbo-ara adayeba ti o ṣeeṣe.
Ní àfikún, a ṣe ìwádìí nípa àìlera TNBC sí àrùn jẹjẹrẹ nípa lílo ìṣàyẹ̀wò CRISPR/Cas9 tí kò ní èròjà nínú ẹ̀jẹ̀, èyí tí ó fi ìsopọ̀ hàn láàrín àwọn ipa ọ̀nà ìdènà àrùn jẹjẹrẹ àti àwọn ipa ọ̀nà ìdènà àrùn jẹjẹrẹ. Àwọn kókó pàtàkì ti ipa ọ̀nà mTOR àti Hippo ni a ti ròyìn láti kó ipa pàtàkì nínú ìṣàkóṣo àrùn jẹjẹrẹ ní TNBC. Ní àfikún, àwọn ìwádìí ti fihàn pé ìdíwọ́ oògùn ti mTORC1/2 àti YAP oncoprotein ń dí àrùn jẹjẹrẹ TNBC lọ́wọ́ nípa lílo àpẹẹrẹ ìṣọ̀kan oògùn in vitro àti àwọn xenografts tí a rí nínú ẹ̀jẹ̀ aláìsàn. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, ìdíwọ́ mTORC1/2 tí Torin-1 ṣe mú kí macropinocytosis pọ̀ sí i, nígbà tí ìdíwọ́ YAP tí verteporfin fà yọrí sí ikú sẹ́ẹ̀lì TNBC. Ní àpapọ̀, àwọn àbájáde wọ̀nyí ṣe àfihàn agbára àti agbára ti ìṣàyẹ̀wò CRISPR in vivo láti dá àwọn ìtọ́jú tuntun àti tí ó munadoko mọ̀ fún TNBC (Dai et al., 2021).
Àìlera ètò ààbò ara jẹ́ kókó pàtàkì nínú ìṣẹ̀dá àrùn jẹjẹrẹ. Àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ máa ń sá fún ìparẹ́ ètò ààbò ara nípa lílo àwọn ọ̀nà ààbò, títí kan dídínà ìṣiṣẹ́ àwọn sẹ́ẹ̀lì ààbò ara nínú àyíká àrùn jẹjẹrẹ àti fífi ètò ààbò ara bàjẹ́. Nítorí náà, ṣíṣẹ̀dá ètò ààbò ara tó dára síi lè jẹ́ ọ̀nà pàtàkì láti gbógun ti àwọn àrùn jẹjẹrẹ. Lílo àtúnṣe jínì tí ó dá lórí CRISPR/Cas9 yanjú ọ̀pọ̀lọpọ̀ ọ̀ràn tó ní í ṣe pẹ̀lú àìlera ètò ààbò ara láti ojú ìwòye ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀. A ti lo CRISPR/Cas9 láti mú ààbò ara ara tó ń dènà àrùn jẹjẹrẹ ọmú sunwọ̀n síi nípasẹ̀ àwọn ọ̀nà wọ̀nyí (Àwòrán 3).
Àwòrán 3. Ìtọ́jú àjẹsára CRISPR/Cas9 ń fojú sí àwọn sẹ́ẹ̀lì TNBC. Pípàdánù CDK5 àti pípadánù PDL1 àti CD155 ń mú kí ètò àjẹsára lágbára síi. Bákan náà, pípadánù A2AR àti pípadánù àwọn TAA bíi HER2, mucin 1 àti TEM8 mú kí iṣẹ́ àwọn sẹ́ẹ̀lì CAR-T pọ̀ síi nínú pípa àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ. Ìṣàyẹ̀wò sẹ́ẹ̀lì T tí CRISPR/Cas9 ń darí ti fihàn pé ìdènà p38 kinase mú kí iṣẹ́ àjẹsára sẹ́ẹ̀lì T pọ̀ síi. Àwọn sẹ́ẹ̀lì T tí CRISPR/Cas9 yí padà ń mú kí ìfarahàn TCR (T cell receptor) pọ̀ síi, èyí tí ó ń mú kí àwọn sẹ́ẹ̀lì T ní iṣẹ́ àjẹsára àrùn jẹjẹrẹ.
Ète ìtọ́jú àrùn ni láti mú kí ètò ìdènà àrùn náà kọlu àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ. Púrọ́tínì àyẹ̀wò ààbò ara tó pọ̀ jù sábà máa ń dènà àwọn ìṣesí ara-ẹni ṣùgbọ́n ó lè ran àwọn àrùn jẹjẹrẹ lọ́wọ́ láti yẹra fún wọn (Topalian et al., 2015). Àwọn púrọ́tínì wọ̀nyí ń dènà àwọn ìṣesí ara-ẹni nípa dídi mọ́ àwọn olugba lórí ojú àwọn sẹ́ẹ̀lì ara-ẹni. Ọ̀pọ̀lọpọ̀ púrọ́tínì àyẹ̀wò (bíi CD155 àti PD-L1) ń fojú sí olugba PD-1 lórí àwọn sẹ́ẹ̀lì ara-ẹni, wọ́n sì ń hàn nínú àrùn jẹjẹrẹ ọmú, pàápàá jùlọ TNBC (Li Y.-C. et al., 2020). Pípa PD-L1 tàbí olugba rẹ̀ nípa lílo CRISPR/Cas9 lè mú kí ètò ara-ẹni náà kọlu àwọn èèmọ́ TNBC (Yahata et al., 2019). Ní ​​àfikún, ìdínkù ìfarahàn PD-L1 nípasẹ̀ pípa CDK5 tí CRISPR/Cas9 ṣe ìtọ́jú ti fihàn pé ó ń dí ìdàgbàsókè èèmọ́ lọ́wọ́ ní vitro àti in vivo (Deng et al., 2020). Àwọn àpẹẹrẹ àrùn jẹjẹrẹ ọmú nínú in vitro àti in vivo fihàn pé ìdínkù CD155 tí shRNA ṣe nípasẹ̀ rẹ̀ lè ní ipa ìtọ́jú lórí àrùn jẹjẹrẹ ọmú (Gao et al., 2018).
Àwọn sẹ́ẹ̀lì CAR T ń fi àwọn CAR hàn tí wọ́n ń dá àwọn antigens tí ó ní í ṣe pẹ̀lú èèmọ́ mọ̀ (TAAs) tí wọ́n sì lè lo ìdènà àwọn protein checkpoint láti mú kí iṣẹ́ wọn sunwọ̀n sí i (Li C. et al., 2020). Ọ̀pọ̀lọpọ̀ ibi tí a lè fojú sí ni a lè fojú sí fún ìtọ́jú sẹ́ẹ̀lì CAR T nínú àrùn jẹjẹrẹ ọmú, títí kan ọ̀pọ̀lọpọ̀ TAA bíi HER2, mucin1, àti TEM8 (Bajgain et al., 2018). Ẹ̀rí wà pé àwọn sẹ́ẹ̀lì CAR T tí wọ́n ń fojú sí mesothelin (tí a fi hàn jù nínú àwọn sẹ́ẹ̀lì TNBC BT-459) máa ń ṣiṣẹ́ dáadáa ju àrùn jẹjẹrẹ lọ nígbà tí a bá pa PD-1 run nípa lílo CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019). Síbẹ̀síbẹ̀, yíya àwọn sẹ́ẹ̀lì T sọ́tọ̀ kúrò lára ​​àwọn aláìsàn àti ṣíṣe àtúnṣe wọn ex vivo jẹ́ ìlànà tí ó gba àkókò púpọ̀ àti tí ó gba àkókò. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn sẹ́ẹ̀lì T gbogbogbò lè dín àwọn ohun tí a nílò láti yà sọ́tọ̀ kù, a gbọ́dọ̀ yọ àwọn sẹ́ẹ̀lì T olùfúnni tí ń sọ antigen leukocyte ènìyàn (HLA) class I àti T cell receptor (TCR) kúrò láti dènà àwọn ìṣòro graft-versus-host (Ren et al., 2017). , 2017a). Nípa lílo CRISPR/Cas9, HDR le mú TCR àti HLA kúrò ní àkókò kan náà kí ó sì pa jínì tí ó ń ṣàkójọ CAR. Àwọn ìwádìí ti fihàn pé a le lo CRISPR/Cas9 láti fi àwọn CAR tí kò fara mọ́ CD19 sínú ibi tí a ń pè ní TCR locus, nípa bẹ́ẹ̀ ó ń mú àwọn CAR jáde lọ́nà tí ó dára láìsí pé ó ń pa àwọn sẹ́ẹ̀lì T run (Dimitri et al., 2022). A ti ṣe àgbékalẹ̀ àwọn ìmọ̀-ẹ̀rọ Multiplex láti mú àwọn sẹ́ẹ̀lì CAR T allogeneic jáde nípa yíyọ TCR, beta-2-microglobulin (B2M), HLA-I subunit àti àwọn protein mìíràn bíi PD-1 àti CTLA-4 kúrò ní àkókò kan náà, èyí tí ó lè ní àwọn ohun-ìní ìdènà àrùn jẹjẹrẹ tí ó pọ̀ sí i. lòdì sí TNBC (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022).
Lílo CRISPR/Cas9 lè mú kí àwọn sẹ́ẹ̀lì CAR-T sunwọ̀n síi. A mọ̀ pé Adenosine ní àwọn ohun tí ó lè mú kí ara bàjẹ́, ó sì lè dín agbára ìdènà àrùn jẹjẹrẹ kù nípa dídínà iṣẹ́ sẹ́ẹ̀lì T àti ṣíṣiṣẹ́ àwọn olùgbà adenosine A2A (A2AR) (Vigano et al., 2019). Lílo CRISPR/Cas9 láti pa A2AR mọ́ mú kí agbára àwọn sẹ́ẹ̀lì CAR-T sunwọ̀n síi ní vivo (Giuffrida et al., 2021). Àwọn sẹ́ẹ̀lì T ni a mọ̀ láti fi onírúurú ànímọ́ phenotypic hàn bí ìfàsẹ́yìn sẹ́ẹ̀lì, ìyàtọ̀, ìdààmú oxidative àti ìdààmú genomic. Ìṣàyẹ̀wò sẹ́ẹ̀lì T tí ó dá lórí CRISPR/Cas9 fi ìdàrúdàpọ̀ àwọn kinases olùgbà T sẹ́ẹ̀lì T 25 ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ hàn. Láàrín wọn, píparẹ́ kinase p38 ti fihàn pé ó mú kí iṣẹ́ ìdènà àrùn jẹjẹrẹ pọ̀ sí i, èyí tí ó fihàn pé kinase p38 jẹ́ olùṣàkóso pàtàkì ti ìlànà sẹ́ẹ̀lì CAR-T (Gurusamy et al., 2020).
A le ṣe àtúnṣe àwọn sẹ́ẹ̀lì T nípa lílo CRISPR/Cas9 láti ṣe àwọn TCR tí ó hàn gbangba. Gbígbé àwọn sẹ́ẹ̀lì T tí a ti yípadà sí àwọn aláìsàn ti fi agbára ìdènà àrùn jẹjẹrẹ hàn ju àwọn sẹ́ẹ̀lì T tí ó ti yípadà sí àwọn aláìsàn lọ. Nítorí náà, àwọn TCR tí ó ti yípadà sí àwọn TCR tí ó ti yípadà sí àwọn aláìsàn, èyí tí ó lè ní ipa lórí agbára ìtọ́jú àrùn jẹjẹrẹ. Láti borí ìṣòro yìí, lílo CRISPR/Cas9 láti yọ TCR-β tí ó ti yípadà sí àwọn sẹ́ẹ̀lì tí a gbà àti lẹ́yìn náà gbé àwọn sẹ́ẹ̀lì TCR-β sí àwọn aláìsàn jẹjẹrẹ le fi àwọn ìdáhùn ààbò àrùn jẹjẹrẹ tí ó dára hàn láìsí àìní ìdíje ìbálòpọ̀ TCR tí ó ti yípadà sí àwọn aláìsàn (Fan et al. 2018). Nítorí náà, yàtọ̀ sí àwọn sẹ́ẹ̀lì T tí a ti yípadà sí CRISPR, àwọn TCR jẹ́ àwọn ìfarahàn sí àwọn antigens tí ó ti yípadà sí àwọn sẹ́ẹ̀lì T tí a ti yípadà sí TCR ní ìgbà ẹgbẹ̀rún. Ní àfikún, nínú onírúurú leukemias, àwọn sẹ́ẹ̀lì T tí a ti yípadà tí γδ TCR+ CRISPR ṣe ń fi ìfarahàn gíga ti àwọn sẹ́ẹ̀lì T CD4+ àti CD8+ hàn ju ìyípadà TCR déédéé lọ (Legut et al., 2018). Nítorí náà, àwọn sẹ́ẹ̀lì T tí a yípadà tí CRISPR/Cas9 ṣe lè jẹ́ ọ̀nà ìtọ́jú àjẹ́mọ́ra tó gbéṣẹ́ láti borí TNBC.
Àwọn Integrins jẹ́ àwọn mọ́líkúùlù ìsopọ̀ sẹ́ẹ̀lì tí ó wà nínú àwọn transmembranes sẹ́ẹ̀lì tí wọ́n sì ń gbé ìsopọ̀ sẹ́ẹ̀lì pọ̀ mọ́ extracellular matrix (ECM) (Hamidi àti Ivaska, 2018). Àìsí ìṣètò integrins ní í ṣe pẹ̀lú ìdàgbàsókè àrùn jẹjẹrẹ àti ìṣíkiri nípa yíyí matrix extracellular pada, èyí tí ó ń yọrí sí ìwàláàyè sẹ́ẹ̀lì akàn nínú ìṣàn ẹ̀jẹ̀ (Hamidi àti Ivaska, 2018). Ìdènà integrin tí CRISPR/Cas9 ṣe ìdarí ń dín ìlọsíwájú àrùn jẹjẹrẹ, ìtasí, àti ìṣètò ní TNBC kù. A ti ròyìn pé pípa integrin a5 (ITGA5) ń dín ìṣíkiri sẹ́ẹ̀lì àti ìtẹ̀síwájú nínú àwọn àrùn jẹjẹrẹ mìíràn bíi àrùn jẹjẹrẹ ẹ̀dọ̀fóró kù (Ju et al., 2017), èyí tí ó fihàn pé integrin a5 tún lè jẹ́ kókó pàtàkì nínú ìṣẹ̀dá TNBC.
Ṣíṣe àwọn eku knockout nípa lílo àwọn ọ̀nà sẹ́ẹ̀lì ìbílẹ̀ embryonic stem (ES) jẹ́ iṣẹ́ tó gba àkókò, tó sì ń gba àkókò, tí kò sì ṣiṣẹ́ dáadáa. Ó gba oṣù àti ọdún láti fojú sí àwọn sẹ́ẹ̀lì ES nípasẹ̀ ìdàpọ̀ homologous, láti bí àwọn eku chimeric, lẹ́yìn náà láti fi àwọn eku heterozygous kọjá wọn láti mú àwọn ọmọ homozygous jáde. Ìbímọ tó díjú ni a nílò láti ṣẹ̀dá àwọn eku pẹ̀lú ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìyípadà jiini. Síbẹ̀síbẹ̀, ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìṣòro ló ti wáyé nígbà tí a bá ń lo àwọn eku tí a ṣe nípasẹ̀ ìyọkúrò àwọn sẹ́ẹ̀lì ES nípa lílo CRISPR/Cas9 tàbí nípa fífún àwọn èròjà CRISPR/Cas9 sínú ẹyin tí a ti sọ di sẹ́ẹ̀lì kan ṣoṣo. Fún àpẹẹrẹ, ìfìhàn àwọn ìyípadà sábà máa ń wáyé ní ibi tí a ti sọ di bíallelic, kì í sì í ṣe ibi tí a ti sọ di bíallelic. A gbọ́ láìpẹ́ yìí pé àwọn sẹ́ẹ̀lì ES tí ń lo ìmọ̀ ẹ̀rọ CRISPR/Cas9 lè fi àwọn ìyípadà biallelic sínú àwọn jínì tó tó márùn-ún (Nishizono et al., 2021). Fún ète yìí, a gbé Cas9 mRNA àti gRNA márùn-ún tí a ṣe pàtó fún jiini sínú àwọn sẹ́ẹ̀lì ES ní àkókò kan náà. Èyí tẹnu mọ́ ìlérí àti ìṣiṣẹ́ ìlànà yìí, bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn ìyípadà wọ̀nyí lè ti wáyé nígbà tí a ń bí àwọn ìlà olùdásílẹ̀ láti mú àwọn eku knockout 40 jáde. Ìwádìí náà tún ròyìn àwárí ìyanu kan: Àwọn sẹ́ẹ̀lì ES kò nílò mọ́ láti ṣẹ̀dá àwọn eku tí a ti yípadà nínú ìpilẹ̀ṣẹ̀. Dípò bẹ́ẹ̀, láti yọ àwọn ọjà ìpilẹ̀ṣẹ̀ pàtó kúrò, a fi Cas9 mRNA àti gRNA sínú àwọn ọmọ inú ìpele sẹ́ẹ̀lì kan. Nítorí náà, a ti ṣẹ̀dá àwọn ìlà olùdásílẹ̀ knockout tí a lè lò ní ti ìmọ̀ láti kẹ́kọ̀ọ́ nípa àwọn àbájáde ìparẹ́ ìpilẹ̀ṣẹ̀ nínú àwọn eku (Qin et al., 2016). Nítorí náà, CRISPR/Cas9 gba àwọn eku transgenic láàyè láti tọ́jú TNBC ní owó tí ó rẹlẹ̀ ju ti ìmọ̀ ẹ̀rọ ìpilẹ̀ṣẹ̀ ìbílẹ̀ lọ. Nípa lílo ètò CRISPR/Cas, a ti ṣe àgbékalẹ̀ àwòṣe eku knockout tuntun kan tí ó lè ṣe àgbékalẹ̀ àwọn ìyípadà point nínú ọ̀kan tàbí jù bẹ́ẹ̀ lọ nínú àwọn jiini endogenous ní TNBC. Ní ìbámu pẹ̀lú èrò yìí, a lè ṣe àgbékalẹ̀ àwọn àpẹẹrẹ ẹranko ti TNBC nípa lílo ìparẹ́ BRCA1 àti p53 tí CRISPR/Cas9 ṣe àgbékalẹ̀ rẹ̀, èyí tí ó yọrí sí pípadánù àtúnṣe HR, àìdúróṣinṣin nínú ìṣẹ̀dá ara, àti àwọn ìrísí ìyípadà ara (Annunziato et al., 2020).
Lọ́wọ́lọ́wọ́, onírúurú ọ̀nà bíi mammography, magnetic resonance imaging (MRI) àti ultrasound ni a ń lò láti ṣe àyẹ̀wò TNBC. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn ọ̀nà wọ̀nyí ní àwọn ààlà díẹ̀. A ń lo mammography láti ṣe àyẹ̀wò àsopọ ọmú àdúgbò dípò metastases, níbi tí àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ ti ṣí lọ sí àwọn ẹ̀yà ara mìíràn. Ultrasonography kìí ṣe ọ̀nà tí ó ṣeé gbẹ́kẹ̀lé fún ṣíṣe àyẹ̀wò TNBC (Chen àti Lee-Felker, 2023). MRI ní ìmọ̀lára gíga ju ultrasound àti mammography lọ, ṣùgbọ́n ìṣedéédé àyẹ̀wò rẹ̀ ní ààlà (Sha àti Chen, 2022). Biopsy tissue jẹ́ ọ̀nà tí ó ń fa ìpalára láti dá àwọn sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ mọ̀. Síbẹ̀síbẹ̀, ní àwọn ìgbà míì, biopsy lè pàdánù àsopọ àrùn jẹjẹrẹ tí abẹ́rẹ́ náà bá yípadà kúrò ní agbègbè tí ó wù ú. Ní àfikún, ó gbowó púpọ̀ ó sì lè jẹ́ ìbànújẹ́ fún aláìsàn. TNBC jẹ́ irú àrùn jẹjẹrẹ tí ó yàtọ̀ síra, nítorí náà biopsy lè má fúnni ní ìwífún tó nípa irú àrùn jẹjẹrẹ náà. Nítorí náà, ọ̀nà tuntun tí ó ṣeé gbẹ́kẹ̀lé fún ṣíṣe àyẹ̀wò TNBC ni a nílò ní kíákíá. CRISPR/Cas9 lè ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí ọ̀nà tí ó ní ìmọ̀lára púpọ̀ àti èyí tí ó kéré jù fún ṣíṣe àyẹ̀wò àrùn jẹjẹrẹ ọmú. Fún èyí, a lè lo àwọn ọgbọ́n ìwádìí CRISPR/Cas9 láti mú àwọn ọ̀nà PCR sunwọ̀n síi fún àyẹ̀wò TNBC. Àkọ́kọ́, a lo àwọn èròjà Cas9 àti cpf1 ti ètò CRISPR láti mú DNA tí kò ṣe pàtó kúrò, lẹ́yìn náà àwọn èròjà protein méjì wọ̀nyí (Cas9 àti cpf1) le dá ìtẹ̀lé PAM mọ̀ kí wọ́n tó so mọ́ DNA tí a fojú sí (Deepak Singh et al., 2021). . Nítorí náà, PCR le dá àwọn ìyípadà tí ó níí ṣe pẹ̀lú ìdàgbàsókè àrùn jẹjẹrẹ mọ̀. Ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìwádìí ti gba ọgbọ́n ìwádìí CRISPR yìí láti ṣàwárí àwọn ìyípadà onírúurú nínú àwọn àrùn jẹjẹrẹ ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ (Safari et al., 2019). Nítorí náà, àwọn ọ̀nà PCR tí ó dá lórí CRISPR le dín ìgbẹ́kẹ̀lé àyẹ̀wò TNBC kù lórí àwọn ọ̀nà ìfagbára bíi biopsy-based immunohistochemistry.
A ti fi awọn iyipada jiini han ninu ilana olugba homonu ninu TNBC (Chen ati Russo, 2009). Awọn ọgbọn PCR ti o da lori CRISPR/Cas9 ti o lo awọn microarrays fun ayẹwo aaye-itọju le ṣe abojuto awọn iyipada wọnyi ni imunadoko (Hajian et al., 2019). O tun le pese awọn olupese ilera pẹlu alaye ti o yẹ nipa awọn iyipada kan pato ninu awọn alaisan TNBC, eyiti o le ṣe iranlọwọ lati mu ilọsiwaju itọju wọn dara si. Sibẹsibẹ, ọna apapọ yii ni awọn idiwọn. Nitorinaa, awọn igbiyanju iwadii gbooro ni a nilo ṣaaju ki a to lo ọna CRISPR/Cas-PCR yii ninu itọju ilera fun ayẹwo TNBC (Yang et al., 2019).